Meginreglur kjarnsýrumyndunar

Kjarnsýrumyndunin fer fram með því að nota fastfasa síalamíð þríglýseríðaðferðina, þar sem 3′ endi DNA er óhreyfður á fastfasa hvarfefni og núkleótíðum er bætt við í 3′ til 5′ átt þar til æskilegt DNA brot er búið til. .Þetta er frábrugðið DNA nýmyndun með því að nota DNA pólýmerasa.

3'-endinn á fyrsta basanum er óhreyfður á CPG meðan á nýmyndun stendur, 5'-OH næsta basa er varinn með dí-p-tólýltrítýl DMT, amínóhópurinn á basanum er varinn með bensósýru og 3' -OH er síðan virkjað með amínófosfat efnasambandi.1 basi af 5 5'-OH af 1 basa og 3'-OH af næsta basa mynda fosfít þríglýseríð, sem síðan er oxað með joði í fosfat þríglýseríð, verndarefnið á seinni basanum 5'-OH er fjarlægt með að bæta við díklóróediksýru DM hringrás með því að bæta við næsta basa, og eftir myndun er verndarefnið á 5'-OH fjarlægt með veikri sýru. Brotið er aftengt úr föstu plastefninu með óblandaðri ammoníumhýdroxíði, verndarefnið er fjarlægt úr basanum með óblandaðri ammóníumhýdroxíði undir upphitun, ammóníumhýdroxíðið er fjarlægt, brotið er lofttæmt þurrkað og kjarnsýran hreinsuð með vökvaskiljun eða PAGE.

Skref ólígomyndunar

Afblokkun

The5 enda DMT verndarhópurinn er fjarlægður með því að bæta við TCA lausn.

Virkjun

Blanda virkjanum við fákirni einliða til að mynda virka fákjarna einliða milliefnið.

Tenging

5-enda hýdroxýlhópurinn hvarfast við virka fákjarna milliefnið í and-myndandi þéttingarhvarfi til að mynda óstöðugt fosfít þríglýseríðtengi.

Lokun 

Viðbót á lokunarefni framkvæmir asetýlerunarlokunarviðbrögð með umfram hýdroxýlhópum sem taka ekki þátt í þéttingarviðbrögðum.

Oxun 

Viðbót á joðlausn sem inniheldur vatn hvarfast við óstöðug fosfíttengi með oxun og myndar stöðug fosfórsýru þríglýseríðtengi.

Sýanóetýl klofning

Kjarnsýruafurðin eftir myndun, með því að bæta við DEA lausn til að fjarlægja sýanóetýl hópinn úr fosfat þríglýseríð tenginu.

Klofið og afverndun

Kjarnsýrubútarnir eru klofnir frá fastfasa burðarefninu með því að bæta við óblandaðri ammoníumhýdroxíðlausn og síðan hituð til að fjarlægja verndarhópana úr vetnistengjum basanna.